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  • 弹性蛋白产品公司.
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采用NS945进行HSE检测

酶的测定方法

人痰弹性酶的活性 

n - such - ala - ala - ala - pna作为底物的测定(44).

所需的材料

  1. Tris-NaCl buffer; 0.1 M Tris pH 7.5在25ºC含0.5 M NaCl和0.01%的南3.   溶解12.70 g Tris-HCl, 2.36g Tris-base, 29.22g NaCl和0.10g NaN3 900 ml H2O.  测定pH值,必要时用0滴定.1 M HCl或0.1m NaOH到ph7.5在25ºC.  加水至1000毫升.
     
  2. 底物溶液1.0 mM. 溶解45.n - su - al - al - al - pna (EPC No . 5mg. NS945) 2.0 ml 1-甲基-2-吡咯烷酮.  加入Tris-NaCl缓冲液至终体积为100 ml.
     
  3. 弹性蛋白酶解. 溶解1.0毫克每毫升在(0.05 M NaOAc pH 5含0.1 M NaCl). 在冰浴中保持低温.


过程

  1. 将分光光度计调至410 nm,细胞温度调至25ºC.
     
  2. 平衡3.0 ml底物溶液在细胞中加热至25℃.
     
  3. 添加0.01毫升弹性蛋白酶溶液, 每隔2-3分钟混合并测定吸收率的增加速度. 增加的速度应该是线性的,持续5到10分钟.
     

比活度计算

Î, 1% , 280 = 6.65 mg/ml = A280 x1.50

Vol = 3.1毫升= 410海里T = 25ºC光路= 1厘米

8.8 = pNA在410 nm处的消光系数

单位  =  ∆A410 x 3.01 ml
mg          8.8 x 0.01 mg

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